1、病史
凡既往有原因不明的死胎、流產、輸血史、新生兒重症黃疸史的的孕婦或生後早期出現進行性黃疸加深，即應作特異性抗體檢查。送檢標本要求爲:①試管應清潔乾燥，防止溶血發生。②產前血型血清學抗體檢查，送產婦和其丈夫的血樣;新生兒檢驗送新生兒血樣爲主，父、母血樣爲輔(如母血不能及時扣帽子取時，可只送新生兒血樣)。③新生兒抽血3ml(不抗凝);產婦抽血5ml(不抗凝);丈夫抽血2ml(抗凝，使用一般抗凝劑)。④如當地不能檢驗，可將產婦血清分離後寄至附近檢驗單位，另抽取2ml抗凝血。天氣炎熱時可將血樣瓶放入有冰塊的大口瓶中，航空郵寄(存放空間必須注意無菌)。
2、血型
孕期由羊水測定胎兒ABO血型，若證實母胎同型者就可免患病之憂，但Rh血型無血型物質需取到胎兒血才能定型。新生兒O型者可排除ABO溶血病，而不能排除其它血型系統的溶血病。
3、特異性抗體檢查
包括母、嬰、父血型、抗體效價、抗人球蛋白試驗(產前做間接法、生後做直接法)、釋放試驗和遊離試驗，這是診斷該病的主依據。
抗人球蛋白間接試驗是用已知抗原的紅細胞去檢查受檢者血清中有無不完全抗體;抗人球蛋白直接試驗是檢測嬰兒紅細胞是否被不完全抗體致敏。釋放試驗若陽性，診斷即可成立，因致敏紅細胞通過加熱將抗體釋放出來，而釋放液中抗體的特異性可用標準紅細胞來確定。遊離試驗是在新生兒血清中檢測是否存在能與紅細胞結合的尚未致敏紅細胞的不完全抗體，結果陽性表明可能受害。
在孕期診斷可能爲該病者，應爭取在妊娠6個月內每月檢驗抗體效介一次，7～8月每半月一次，8個月以後每週一次或根據需要決定。抗體效價由低到高，起伏頗大或突然由高轉低均提示病情不穩定，有加重可能，效價維持不變提示病情穩定或母嬰血型相合，該抗體僅屬以前遺留所致。排除遺留因素後，一般發病輕重與抗體效價成正比，但ABO系統受自然界存在類似抗A(B)物質關係，有的未婚女子效價已達1024。通常ABO溶血病的效價64作爲疑似病例，但個別效價爲8時也有發病的報道。
4、羊水檢查膽紅素含量
它不象抗體效價受前一胎遺留下來的影響，故羊水膽紅素含量對估計病情和考慮終止妊娠時間有指導意義，正常羊水透明無色，重症溶血病時凌晨水呈黃色。
Liley發現450mm處光密度的升高與胎兒溶血病的嚴重程度呈一定比例。由於正常胎兒羊水中膽紅素的濃度隨孕周增加而降低，故在不同孕周所測得的450mm處光密度的升高數，有不同的意義。Liley從101名Rh免疫婦女羊水中所得結果，以450mm的光密度增加數爲縱座標，孕周爲橫座標，繪成一經驗圖，分三個區，羊水中450mm處光密度的增加數在上區者，病情嚴重，一般即將死亡。在中區者，中度病重，在下區者，可能爲Rh陰性兒或爲貧血極輕的Rh陽性兒，僅10%需要換血。
5、影像檢查
全身水腫胎兒在X光攝片可見軟組織增寬的透明帶四肢彎曲度較差。B超檢查更爲清晰，肝脾腫大，胸腹腔積液都能反映於熒光屏。
6、其它實驗室檢查
對診斷該病同樣有參考價值的檢查。
